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荧光分析法定量分析的依据
发布时间:2012-12-14   点击次数:3742

荧光强度犐犳正比于吸收激发光强犐犪与荧光效率且增大入射光的强度,可以增大荧光的强度。对于较浓的溶液,由
于荧光熄灭和自吸收等原因,使荧光强度与溶液的浓度不呈线性关系。
荧光分析所用的仪器可分为目视、光电和分光三种类型。它
们通常都是由激发光源、单色器或滤光片、样品池和检测系统四个部分组成。如图8-5所示。
(一)激发光源 荧光分析要求激发光源应有较强和稳定的
光强输出。常用氙灯和高压汞灯。
氙灯是连续光源,可用于200~700狀犿波长范围。
高压汞灯发射不连续光谱,在荧光分析中常用365,405,436狀犿3条谱线。
(二)单色器
荧光计有两个单色器:激发单色器和发射单色器。在荧光分光光度计中常用光栅作为色散元件。
(三)样品池
样品池采用低荧光、不吸收紫外光的石英材料制成。
选用具有较高灵敏度的光电倍增管检测荧光信号。
由激发光源发出的光,经激发单色器后得到所需要的激发光
波长λ犲狓,设其强度为犐0。通过样品池后,由于一部分光被荧光物
质所吸收,其透射光强度减为犐狋。荧光物质被激发后,将向四面
八方发射荧光。为了消除入射光和散射光的影响,荧光的测量应
在与激发光成直角的方向上进行。因此利用发射单色器,选择适
宜的发射光波长,消除来自溶液中可能存在的其他谱线的干扰,利
用检测器可获得最大的荧光强度。
荧光分析法的优点是灵敏度高(一般比紫外-可见吸收光谱
法高2~3个数量级),选择性好,工作曲线线性范围宽,且能提供
分子的激发光谱、荧光光谱、荧光寿命、荧光效率及荧光强度等诸
多信息。因此,它不但已成为一种重要的痕量分析技术,还能从不
同角度为研究分子结构提供信息,使其在生物化学和药物学方面
的研究发挥重大作用。