磷光分析法
发布时间：2012-12-14 点击次数：2210
在研究生物活性物质与核酸的作用及蛋白质的结构和机能方
面，荧光分析法是重要的手段之一。
磷光产生的机理，在８－１节中已讨论过，其仪器和应用也与
分子荧光分析法相似。与荧光分析法相比，磷光分析法具有以下
三个特点：（犻）磷光的发射波长大于荧光的发射波长。这是因为
分子激发三重态犜１能量比激发单重态犛１ 能量低；（犻）磷光的寿
命比荧光长，由于荧光是犛１→犛０跃迁产生的，这种跃迁是自旋许
可的跃迁，因而犛１态的辐射寿命通常在１０－９～１０－７狊，磷光是犜１
→犛０跃迁产生的，这种跃迁属于自旋禁阻的跃迁，其速率常数要
小得多，因而辐射寿命较长，大约１０－４～１０狊；（犻）由于磷光是由
激发三重态经禁阻跃迁返回基态，很容易受其他辐射或无辐射跃
迁的干扰而使磷光减弱，甚至完全消失。为了获得较强的磷光，宜
采取下列一些措施：
１．低温磷光 在低温如液氮（７７犓）甚至在液氦（４犓）的冷冻
下，使样品冷冻为刚性玻璃体。这时振动耦合和碰撞等无辐射去
活化作用降到最低限度，磷光增强。
２．固体磷光 在室温条件下，测量吸附在固体基质上（如滤
纸，硅胶等）的待测物质所发射的磷光，称为固体磷光法。这样可
以减少激发三重态的碰撞熄灭等无辐射跃迁的去活化作用，获得
较强的磷光。
３．分子缔合物的形成 在试液中，表面活性剂与待测物质形
成胶束缔合物后，可增加其刚性，减少了激发三重态的内转化及碰
撞熄灭等无辐射跃迁去活化作用，增加了激发三重态的稳定性，获
得较强的磷光。
４．重原子效应 如前所述，在含有重原子的溶剂中，将使待
测物质的荧光减弱，磷光得到加强。
磷光分析法
